DNA-easy blood and tissue mini kit

DNA-easy blood and tissue mini kit

                Ini adalah salah satu nama paket produk yang dihasilkan oleh Qiagen, produk ini berguna untuk memudahkan kita dalam melakukan purifikasi DNA dari darah atau jaringan hewan ataupun bacteri. Pada paket ini, semua buffer tersedia dalam bentuk kering (serbuk) dan aman pada temperature ruangan (15-25 ^oC) serta bisa bertahan hingga 1 tahun. Pada paket ini juga terdapat proteinase-K yang siap digunakan dan proteinase-K ini tersedia dalam buffer khusus. Proteinase-K ini stabil paling tidak selama 1 tahun pada suhu ruangan. Untuk penyimpanan dalam jangka panjang sebaiknya disimpan pada suhu 2-8^oC.

PROSEDUR DAN PRINSIP KERJA

                Prosedur DNA-esay ini sangat simple. Pertama kali sampel di lysis menggunakan proteinase K. Penggunaan buffer bertujuan untuk memberikan kondisi optimum yang sesuai dengan kondisi pengikatan DNA dan lysis dilakukan didalam minispin kolom DNA-esay. Pada waktu sentrifugasi, DNA akan terikat pada membrane yang berada dalam kolom minispin. Kontaminan yang lain dan enzim inhibitor dihilangkan dengan menggunakan dua tahap pencucian. DNA dilarutkan dalam air atau buffer, sehingga siap digunakan. DNAesay purifikasi DNA memiliki perbandingan A260/A280 adalah 1.7-1.9 dan absorbansinya menunjukan peak yang simetric pada 260 nm yang berarti memiliki kemurnian yang tinggi.

                Membrane DNAesay (yang terdapat dalam mini spin kolom) bekerja dengan memanfaatkan  kombinasi antara pengikatan silica dengan teknologi microspin sederhana. DNA yang diserap di membrane DNA esay memiliki konsentrasi garam chaotropik yang tinggi, yang dapat menghilangkan air dari molekul hydrat didalam larutan. Kondisi buffer didesain untuk memungkinkan pengikatan yang spesifik pada membrane silica gel, dan menghilangkan ckontaminan dan enzim inhibitor. 

PERSIAPAN BUFFER 

Buffer AW1 dan AW2 tersedia dalam bentuk konsentrat. Sebelum digunakan, pada waktu pertamakali perlu ditambahkan ethanol 96-100%. Buffer ini stabil setidaknya selama satu tahun jika disimpan pada suhu ruangan 15-25^oC.

Pada purifikasi dari jaringan hewan, Buffer AL dan ethanol bisa ditambahkan dalam waktu bersamaan untuk menghemat waktu.  

PROTEINASE K

Pada paket DNeasy Blood & Tissue Kits terdapat proteinase K yang siap digunakan yang mana disediakan dalam suatu formula khusus yang dapat bertahan pada saat penyimpanan. Aktivitas proteinase K adalah 600 mAU/ml larutan (40 mAU/mg protein), dan telah dipilih untuk mendapatkan hasil yang optimal. Selain itu, dalam paket ini juga telah disediakan buffer ATL yang sangat membantu mengoptimalkan proses lisys jaringan. Untuk lebih mengeficiensikan proses lysis, sebaiknya potong jaringan dalam ukuran kecil. Jika mau, waktu lysis bisa diturunkan 20 menit dengan menggiling terlebih dahulu sampel didalam nitrogen cair (HATI-HATI) sebelum ditambahkan buffer ATL dan proteinase K. Sebagai alternatifnya, jaringan sampel bisa dihomogenkan dengan menggunakan rotor-stator homogenizer sebelum dicerna dengan proteinase K. Proteinase K stable setidaknya selama satu tahun setelah pengiriman jika disimpan pada suhu ruangan ( 15-25^oC). untuk penyimpanan yang lebih lama sebaiknya disimpan pada suhu 1-8^oC.

BAGAN PROSEDUR KERJA PURIFIKASI DNA DARI DARAH DAN JARINGAN HEWAN

  

Keterangan : bagan sebelah kiri untuk prosedur DNAesay mini spin coloumn, sementara yang bagian kanan untuk DNAesay Plate.

Berikut adalah protokol singkat tentang purifikasi dengan menggunakan DNAesay minispin kolom