PROTOKOL EXO SAP

PROTOKOL EXO SAP

Setelah kita mendapatkan hasil positif pada PCR, selanjutnya kita lakukan pembersihan terhadap sisa-sisa primer dan DNTP dan reagen-reagen yang tidak bekerja, yaitu dengan menggunakan enzim Exonuklease dan SAP (shrimp alkaline fosfatase). Adapun caranya yaitu:

1.       Siapkan semua PCR produk yang positif.

2.       Isi Form Exo Sap, dan juga data tube PCR, yang mengerjakan, dan nomor tube.

3.       Siapkan strip tube, dan beri label sesuai form Exo Sap

4.       Ambil 5 μL PCR produk, kemudian masukan dalam strip tube yang telah dilabel.

5.       Buat mastermix dengan mengambil 0,5 μL enzim Exo dan 0,5 μL Sap untuk setiap tubenya. Jika kita punya 48 sampel, maka kita butuhkan 5 tambahan untuk kemungkinan error pipeting.

6.       Campur hingga merata mastermix, kemudian ambil 1 μL master mix, dan tambahkan pada masing-masing tube. Campur dengan pipet.

7.       Kerjakan hingga semua tube terisi mastermix.

8.       Masukan semua tube kedalam mesin PCR, dengan program EXO SAP, yaitu : 37^oC selama 30 menit, dan 80 ^oC selama 20 menit, serta 10 ^oC forever.

9.       Running di mesin PCR.