Thursday, September 16, 2010

PROTOKOL GOLD PCR


PROTOKOL PCR GOLD
1.    Siapkan sampel produk ekstraksi, kemudian isi form PCR. Hitung jumlah sampel dan buat mastermix untuk jumlah sampel ditambah control negative n tambah 1 untuk eror pipetting. Misalnya kita punya sampel 5, tambah control negative 1 dan eror 1 maka kita buat mastermix untuk 7 tabung. Jika telah punya hasil yang positif, kita juga bisa tambahkan control positif. Tambahkan 1 eror untuk setiap kelipatan 10.
2.    Siapkan semua reagen ( H2O, Buffer PCR GOLD (KUNING), DNTPs, MgCl2, dan primer forward dan revers
3.    Ambil 1 buah tabung strip lengkap dengan tutupnya. Beri label inisial, tanggal, dan primer. Kemudian tulis nomor 1 sampai 8 pada leher tabung strip. Siapkan 1 tabung eppendrof 0,5 mL dan beri label MM (master Mix)
4.    Sekarang, kita cairkan semua reagen (biasanya disimpan di frezer, pastinya beku, makanya perlu dicairkan) dengan menggenggam erat dan pastikan semuanya mencair dengan sempurna. Kocok-kocok untuk memastikan tidak ada komponen yang terendap didasar tabung.
5.    Sebelum memipet reagen, selalu mix terlebih dahulu dengan menggunakan pipet.
6.    Ambil H2O sesuai hitungan yang telah kita dapat, dan masukan ke tabung MM (volume sesuai protocol)
7.    Selanjutnya, masukan Buffer PCR, dNTPs, MgCl2, Primer 1 dan 2, serta enzim taq gold (ambil dengan pipet kusus enzim dan segera kembalikan ke frezer enzimnya, AWAS BARANG MAHAL)
8.    Kemudian bagikan 24 µL MM kedalam masing-masing lubang tabung strip yang telah kita label, dan masukan DNA template hasil ekstraksi sebanyak 1 µL, jangan lupa di mix setiap kali memasukan DNA.
9.    Untuk meyakinkan pencampuran dan menghilangkan bubel, maka usahakan di spin.
10. Selanjutnya, tutup rapat-rapat tabung strip yang telah berisi DNA dan MM, dan masukan kedalam thermocycler. Running mesin dengan program Gold.
11. Tunggu hingga proses berakhir, dan beres dah…. Selamat menunggu hasilnya…..
Post a Comment

Share This

PERLU ANDA TAHU

temukan semuanya di sini